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Hart Biologicals Ltd, 2 Rivergreen Business Centre, Queens Meadow, Hartlepool TS25 2DL. UK Tel: +44 (0) 1429-271100 Fax: +44 (0) 1429-277085 www.hartbio.com, e-mail: info@hartbio.com

ANWENDUNGSBEREICH

Das GpIIb/IIIa Antagonist Reagent von Hart Biologicals wird als Positivkontrolle bei Untersuchungen der Blutplättchenaggregation mit humanem plättchenreichem Plasma (PRP) oder Vollblutproben verwendet.

ZUSAMMENFASSUNG

Das GpIIb/IIIa Antagonist Reagent enthält einen synthetischen Inhibitor des Plättchen-Glykoprotein IIb/IIIa-Rezeptors auf humanen Blutplättchen¹,². Dieser Rezeptor ist für die Fibrinogen-Bindung an Blutplättchen verantwortlich. Er lässt ein Crosslinking zwischen den Blutplättchen während der Plättchenaggregation zu. Das Hart Biologicals GpIIb/IIIa Antagonist Reagent kann einem Plättchenaggregationstest hinzugefügt werden, um zu bestätigen, dass die Plättchenfunktion gehemmt werden kann, wenn die Patientenergebnisse nicht wie erwartet sind.

TESTPRINZIP

Der Plättchenaggregationstest misst die Schnelligkeit und das Ausmaß, in dem verteilte Blutplättchen in einer Probe mit plättchenreichem Plasma (PRP) oder antikoaguliertem Vollblut nach Zugabe einer Substanz, die gewöhnlich die Plättchenaggregation anregt (Agonist), Klumpen (Aggregate) bilden. Bei der optischen Aggregometrie bewirkt die Zusammenballung von Blutplättchen, dass die Trübung des plättchenreichen Plasmas abnimmt. Dies wird mittels Plättchen-Aggregometer gemessen, der die Schnelligkeit und das maximale Ausmaß der Aggregation misst. Bei der Vollblut-Aggregometrie haften Blutplättchen an kleinen Drähten, die in die Blutprobe abgehängt werden, und es wird die Impedanz zwischen den Drähten gemessen, wenn die Blutplättchen anhaften. Der Klumpen wird gemessen und aufgezeichnet. Die Zugabe von Hart Biologicals GpIIb/IIIa Antagonist Reagent zu den Test-Blutplättchen vor der Aktivierung mit Reagenzien wie ADP, Kollagen, TRAP-6 oder Arachidonsäure führen zu einer erheblich gehemmten Plättchenaggregation oder gar keiner Aggregation. Wenn ein normales Ausmaß an Aggregation in Gegenwart von GpIIb/IIIa Antagonist Reagent aufgezeichnet wird, sind andere, nicht spezifische Gründe für die Plättchenaggregation in Betracht zu ziehen.

WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN

Nur für in vitro Diagnostik. Nicht mit dem Mund pipettieren. Das Rauchen, Essen und Trinken ist in Bereichen, in denen Proben oder Kit-Reagenzien gehandhabt werden, untersagt. Beim Handling von Proben und Kit-Reagenzien Einweghandschuhe tragen. Anschließend Hände gründlich waschen.

INHALT

GpIIb/IIIa Antagonist Reagent

Inhaltsstoffe: Das Reagenz ist ein Flüssigreagenz und enthält 50µg/ml (101µM) GpIIb/IIIa Antagonist mit zugegebenem Puffer und Stabilisatoren.

Vorbereitung für den Gebrauch: Das GpIIb/IIIa Antagonist Reagent ist gebrauchsfertig.

Lagerung und Stabilität: Ungeöffnete Fläschchen mit GpIIb/IIIa Antagonist Reagent sind bei 2-8°C aufzubewahren. Das Reagenz ist bis zu dem auf dem Flaschenetikett angegebenen Verfallsdatum stabil. Geöffnete Fläschchen mit dem Reagenz sind 30 Tage stabil, wenn sie bei 2-8 °C gelagert werden.

NICHT ENTHALTENE, ABER NOTWENDIGE MATERIALIEN

Plättchenaggregometer – Hart Biologicals GpIIb/IIIa Antagonist Reagent lässt sich auf jedem Aggregometer gut einsetzen. Gebrauchsanweisung des entsprechenden Herstellers beachten.

PROBENENTNAHME UND VORBEREITUNG³

Aufbereitung von plättchenreichem und plättchenarmem Plasma für den optischen Aggregationstest

Das für den Plättchenaggregationstest benötigte Blut in Kunststoffspritzen oder in Blutentnahmeröhrchen aus silikonisiertem Glas entnehmen und in Kunststoffröhrchen übertragen.

Das Blut (9 Anteile) mit 0,11 M oder 0,13 M Natriumcitratantikoagulans (1 Anteil) mischen. Behutsam drehen, um zu mischen.

• Das plättchenreiche Plasma bei Raumtemperatur durch 10-15 minütiges Zentrifugieren des antikoagulierten Blutes bei 150-200 x g präparieren.
• Das plättchenreiche Plasma mit einer Kunststoffpipette entnehmen und in einen Kunststoffbehälter (mit Stopfen) geben, der das Label „PRP“ trägt. Stopfen aufsetzen und Behälter auf Raumtemperatur halten.
• Das plättchenarme Plasma durch 20minütiges Zentrifugieren der restlichen Blutprobe bei 2000 x g präparieren.
• Das plättchenarme Plasma mit einer Kunststoffpipette entnehmen und in einen Kunststoffbehälter (mit Stopfen) geben, der das Label „PPP“ trägt. Stopfen aufsetzen und Behälter auf Raumtemperatur halten.
• Die Plättchenkonzentration im PRP-Behälter mit Hilfe des PPP auf 200-300 x 10⁹/L einstellen, Stopfen aufsetzen und vor dem Test 30 Minuten bei Raumtemperatur stehen lassen.
• Der Test sollte innerhalb von 3 Stunden nach der Blutentnahme abgeschlossen sein.

Proben für die Vollblut-Aggregation

Empfehlungen des Herstellers des Aggregometers für die Präparation von Proben für die Vollblut-Aggregometrie beachten.

TESTVERFAHREN

A) Optische Aggregometrie

1. 0 % und 100 % Plättchen-Spiegel auf dem Aggregometer einstellen. Dazu plättchenarmes und plättchenreiches Plasma verwenden. Anweisungen des Geräteherstellers befolgen.
2. Das benötigte Volumen an plättchenreichem Plasma in eine Aggregationsküvette pipettieren und Rührstäbchen hinzufügen.
3. GpIIb/IIIa Antagonist Reagent in dem benötigten Volumen bzw. der benötigten Konzentration in die Küvette geben. Dies werden in der Regel 10 % des Test-Endvolumens sein.
4. Plasma 120 Sekunden auf 37 °C vorwärmen.
5. Das benötigte Volumen des Plättchenaggregationsreagenz (z. B. ADP, Kollagen, Arachidonsäure oder TRAP-6) direkt in die Küvette geben. Vermeiden, dass das Reagenz seitlich an der Küvette herunterläuft.
6. Mindestens 5 Minuten warten, bis sich ein Aggregationsmuster gebildet hat.

B) Vollblut-Aggregometrie

Siehe Empfehlungen des Herstellers zur Ausführung des Tests.

QUALITÄTSKONTROLLE

Die Ergebnisse der Plättchenaggregationsuntersuchungen sind mit den Ergebnissen von Aggregationsprofilen einer zur gleichen Zeit geprüften normalen Probe zu vergleichen. Der normale Spender sollte in den vorausgegangenen 10 Tagen kein Aspirin bzw. keine aspirinhaltigen Substanzen eingenommen haben und keine anderen Plättchenaggregationshemmer einnehmen.

ERWARTETE WERTE

Die Verwendung von GpIIb/IIIa Antagonist Reagent sollte zu einer erheblich reduzierten Aggregation oder gar keinen Aggregation stimulierter Blutplättchen führen.

WEITERE TESTS

Bei abnormalen Testergebnissen sollte der Test separat wiederholt werden. Wenn die Ergebnisse durchgängig abnormal sind und der Patient keine Medikamente einnimmt, die unseren Kenntnissen zufolge die Plättchenfunktion beeinträchtigen, ist die Ausführung zusätzlicher Tests zu erwägen.

EINSCHRÄNKUNGEN

Bei der optischen Aggregometrie bewirkt das Vorliegen von roten Blutzellen im PRP eine Minderung der insgesamt beobachteten Aggregation. Das Vorliegen von Blutplättchen im PPP bewirkt eine Erhöhung der insgesamt beobachteten Aggregation. Falsche Ergebnisse sind festzustellen, wenn die Gesamtzahl der Plättchen im PRP unter 75 x 10⁹/L liegt. PRP, das weniger als 30 Minuten nach der Präparation getestet wird, kann abnormale Aggregationsprofile zeigen.

Literatur

1. Peerlinck, De Lepeleire, I., Goldberg, M et al. ‘A Selective Nonpeptide Platelet Glycoprotein IIb/IIIa Antagonist, Is Active In Man’, Circulation, 1993; 88: 1512-1517
2. Kumar, A. and Herrmann, H.C. ‘Tirofiban: An Investigational Platelet Glycoprotein IIb/IIIa Receptor Antagonist’. Exp. Opin. Invest. Drugs. 1997; 6: 1257-1267
3. Dacie & Lewis, ‘Practical Haematology’, Lewis, S.M., Bain, B.J. and Bates, I. (Editors); 9ᵗʰ Edition, Elsevier Science Ltd., 2002, pages 383-385